Identificación de Cocos Gram Positivos: Género Staphylococcus

Procedimiento

  1. Observar placas sembradas con las diferentes especies de Staphylococcus, estudiando las características de las colonias en medios de Agar sangre y Agar Hipertónico de Chapman (tamaño, forma, pigmento, hemólisis, etc.).
  2. De la placa con Agar sangre y Agar Hipertónico de Chapman, tomar una asada de una colonia de color amarillo e inocularlo en el tubo con caldo plasma e incubar a 37ºC (Prueba de la coagulasa).
  3. Realizar la prueba de la Catalasa.

Resultados

  1. Características macroscópicas de la muestra:
  2. Resultado de la coloración realizada
  3. Resultado de la reacción de la Coagulasa, en caldo plasma observar que sólo S. aureus coagula el plasma.
  4. Resultado de la reacción de Catalasa, agregando agua oxigenada y observando la aparición de burbujas en las tres especies.
  5. Resultado en Agar hipertónico de Chapman observar las colonias amarilla (manita positivas) de S. aureus y S. saprofiticus; y color rosado (manita negativa) en S .epidermidis.
  6. Observar la presencia de hemólisis en las placas con Agar sangre
  7. La novoviacina permite diferenciar S. epidermidis de S. saprofiticus. S. epidermidis es sensible y S. saprofiticus resistente.

Identificación de Cocos Gram Positivos: Género Streptococcus

Introducción

El género Streptococcus comprende muchas especies agrupadas según la clasificación de Lancefield en los grupos A (S. pyogenes); B (S. agalactiae); C (Ej. S. equi); D (Ej. Enterococos); G (S. canis); H (S. sanguis); K (S. salivarius) y Streptococcus pneumoniae (no pertenece a ningún grupo). Con la coloración de Gram se comportan como positivos adoptando formas de cadenas. Algunos son patógenos para el hombre y los animales, otros forman parte de la flora normal o transitoria del cuerpo humano y otros son saprofitos.

Los Streptococcus desarrollan en medios enriquecidos como el Agar sangre, que permite diferenciar algunas especies en base a la hemólisis producida. La hemólisis tipo alfa es incompleta, los glóbulos rojos que rodean a la colonia son parcialmente dañados pero no lisados como sucede en la hemólisis tipo . Existe un enverdecimiento del medio debido a la salida del eritrocito de un derivado del tipo de la metahemoglobina, que es oxidado a compuestos como la biliverdina. El grupo de estreptococos alfa hemolíticos se denominan S. viridans. La mayoría de Streptococcus pueden desarrollar en presencia o ausencia de oxígeno. Diversas pruebas bioquímicas permiten la diferenciación de las especies de Streptococcus.

Procedimiento

  1. Observar el desarrollo de Streptococcus en el medio de caldo BHI, si el crecimiento produce turbidez o sedimento.
  2. Observar el desarrollo de la bacteria en Agar sangre, sembrado por el método de dispersión y agotamiento e incubado a 37°C por 18- 24 horas. Realizar un frotis en la lámina portaobjetos y colorear por Gram.
  3. Estudiar el comportamiento de las especies de Streptococcus, frente a la Bacitracina y el disco de Optochin,
  4. Sembrar las cepas bacterianas en el medio de Thioglicolato.
  5. Sembrar la cepa en el caldo de Inulina.
  6. Sembrar la cepa en el tubo con ClNa al 6.5%
  7. Realizar la prueba de la catalasa
  8. Realizar la prueba de Desoxicolato de sodio, permite observar la capacidad de ciertas bacterias de lisarse en presencia de sales biliares

Lectura

  1. En Agar sangre, S. pyogenes y S. agalactiae son beta- hemolíticos; S. viridans y S. pneumoniae son alfa- hemolíticos. Realizar el frotis de las colonias y colorear por Gram.
  2. Respecto a la sensibilidad a la Bacitracina y Optochina: S. pyogenes es sensible a la Bacitracina y S pneumoniae es sensible a la Optochina
  3. Agregar una gota del Desoxicolato de sodio al 2% sobre una o varias colonias en la placa de Agar sangre e incubar a 35°C durante 30 minutos. En una reacción positiva se observa que las colonias son lisadas (desaparecen)
  4. Observar que solo S. pneumoniae metaboliza la Inulina.
  5. Observar el desarrollo en el medio de Thioglicolato. Este medio es usado para determinar el efecto del O2 sobre las bacterias (Aerobio, Anaerobio, Facultativo), contiene Agar 0.075% y ácido tioglicolato que actúa como agente reductor disminuyendo aun más el potencial de oxido- reducción del medio.
  6. En la solución de ClNa al 6.5% , observar que sólo desarrolla Enterococo (Grupo D)
  7. Todas las especies del género Estreptococo son catalasa negativa