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Técnicas de Inmunodiagnóstico y Serología Clínica
Cuestionario de Autoevaluación en Inmunología
Preguntas y Respuestas Técnicas
- ¿Qué partículas no son inertes? Bacterias.
- ¿Proceso por el que unas partículas son recubiertas con algo? Sensibilización.
- En la placa de microtitulación-Inhibición de la hemaglutinación: El resultado es positivo (+) en botón.
- ¿Cómo se llama la cantidad de suero problema que es capaz de detectar la prueba? La mínima cantidad de sensibilidad.
- Sobre la generación de hibridomas, ¿para qué la utilizamos? (Opción incorrecta): Linfocitos T aislados.
- Opción falsa sobre la aglutinación: La que utiliza eritrocitos como soporte.
- ¿Cuándo la aglutinación se ha producido en exceso de Ag? Postzona.
- Sobre la IgG, indica la respuesta correcta: Actúan como opsoninas.
- ¿Cuál es la Ig del BCR? La IgD (de superficie).
- La falsa sobre la IgM: Es un dímero.
- Señala la afirmación falsa respecto a la respuesta humoral secundaria: La fase de latencia es más larga en la primaria.
- Si en una hemaglutinación indirecta en placa de microtiter se forma un botón en todos los pocillos: Se trata de un resultado negativo (-).
- ¿Cuál de las Igs está en la mucosa? IgA.
- Una IgG puede tener: 2 cadenas ligeras lambda.
- Indica la respuesta falsa: Las partículas de látex son unos buenos portadores al ser antigénicamente inertes en las aglutinaciones directas.
- En la respuesta primaria en la producción de Ac frente a un estímulo antigénico, señala la falsa: Existe mayor rapidez e intensidad de producción de Ac por parte del huésped.
- La reacción de la aglutinación en la que la presencia de aglutinación indica que el paciente tiene Ac frente a la suspensión bacteriana: Ninguna es cierta.
- ¿Qué es TPHA? La prueba treponémica para la sífilis, que es una aglutinación indirecta (GR).
- Señala la verdadera en la inmunoelectroforesis: La mezcla antigénica de la muestra se une a una electroforesis.
- Sobre la prueba de Coombs directa, señala la falsa: Permite la detección de Ig anti-Rh en el suero materno.
- ¿Qué técnica de precipitación en gel somete el antígeno y el anticuerpo a electroforesis? Contrainmunoelectroforesis.
- ¿Para el diagnóstico de qué enfermedad se utilizan los Ac heterófilos? Mononucleosis infecciosa.
- El valor predictivo positivo: Es el % de personas con resultado positivo (+) en la prueba y que están enfermos.
- La activación de la vía clásica: La convertasa de C3 es C4b2b.
- ¿Qué es la hemolisina en las técnicas de fijación del complemento? Son Ac anti-hematíes de carnero.
- ¿El resultado positivo en una prueba en dos etapas para la fijación del complemento? Es la no hemólisis.
- Se realiza una batería de diluciones de un suero con dilución doble. ¿Cuál es el título? Es 160.
- ¿La luz de la nefelometría? Es dispersada.
- En la inmunodifusión radial observamos el resultado: Como un anillo de precipitación.
- En la técnica de Mancini, ¿qué lleva habitualmente disuelto en el agar? El Ac.
- ¿En cuál de estas técnicas se produce la difusión espontánea de los reactantes (Ag y Ac)? En la inmunodifusión doble e inmunodifusión radial.
- ¿Cuál de estas afirmaciones es falsa respecto a la técnica de Ouchterlony? A mayor concentración de la muestra se da una línea de precipitación más lejana y menos gruesa.
- ¿La técnica de la inmunodifusión radial forzada por aplicación de corriente eléctrica se llama? Electroinmunodifusión o inmunoelectroforesis en cohete.
- En la inmunoelectroforesis el resultado se aprecia como: Líneas de precipitación en forma de arco.
- En un test de Ouchterlony, si dos antígenos presentan líneas de precipitación cruzadas: Existe no identidad entre ambas.
- Diagnóstico de toxoplasmosis en gestante: Se concluye que hay que poner un tratamiento porque la primera muestra de IgM es (+) y la IgG es (+), y en la segunda muestra se observa mayor cantidad de IgG y es de baja avidez.
- Respecto a las técnicas de inmunofijación, señala la falsa: Las proteínas que precipitan se tiñen con fluoresceína.
- En las técnicas de fijación del complemento en una etapa: Sirven para cuantificar el nivel total del sistema del complemento.
- Señale la respuesta falsa de la técnica de fijación de complemento en dos etapas: El % de hemólisis es directamente proporcional.
Conceptos Fundamentales de Diagnóstico
Sensibilidad y Especificidad
Sensibilidad: Es la mínima cantidad de sustancia que puede ser detectada de forma fiable por un método en particular. Cuanto más sensible sea una técnica analítica, menor será la concentración de sustancia que puede detectar (menos falsos negativos).
Matemáticamente: S = VP / (VP + FN). Es la proporción de resultados verdaderos positivos (VP) detectados en pacientes con la enfermedad.
Especificidad: Capacidad de una técnica para diferenciar la sustancia que se desea detectar entre otras sustancias presentes en la muestra. Cuanto más específica sea, menos reacciones cruzadas presentará (menos falsos positivos).
Matemáticamente: E = VN / (VN + FP). Es la proporción de verdaderos negativos (VN) detectados en personas sanas.
Valor Predictivo
Indica si la prueba es válida para diagnosticar una enfermedad en un grupo de población determinado.
- Valor Predictivo Positivo (VPP): Porcentaje de personas con resultado positivo que realmente están enfermos. VPP = (VP / (VP + FP)) x 100.
- Valor Predictivo Negativo (VPN): Porcentaje de personas con resultado negativo que realmente están sanos. VPN = (VN / (VN + FN)) x 100.
En zonas endémicas, el más importante es el VPN, ya que no todos los individuos con resultado positivo están padeciendo la enfermedad debido a la inmunización previa.
Técnicas de Aglutinación
Aglutinación Directa
- El Ag está situado de forma natural en la partícula (bacteria, célula o virus).
- Técnicas simples y sensibles con formación de agregados visibles.
- Prueba de Rosa de Bengala: Diagnóstico de brucelosis mediante Brucella abortus.
- Hemaglutinación directa: Determinación de grupos sanguíneos (ABO y Rh).
Aglutinación Indirecta
El anticuerpo reacciona con un antígeno transferido artificialmente a la superficie de partículas inertes. Es más sensible que la directa.
- ASLO látex: Determinación de anticuerpos antiestreptolisina O.
- RPR carbón: Prueba no treponémica para sífilis.
- Hemaglutinación indirecta (HAI): Ejemplo TPHA para sífilis o Toxoplasma gondii. Utiliza hematíes sensibilizados.
- Aglutinación Indirecta Inversa: Utiliza anticuerpos fijados a partículas para detectar antígenos solubles (ej. PCR látex o βHCG látex).
Inhibición de la Hemaglutinación (IHA)
Utilizada para detectar anticuerpos frente a virus hemaglutinantes (rubéola, dengue). Un resultado positivo se evidencia por la ausencia de aglutinación (formación de botón en el fondo).
Valoración y Titulación
El título es la inversa de la máxima dilución del suero que produce aglutinación visible. La Unidad Mínima Detectable (UMD) multiplicada por el título permite calcular la concentración o tasa de la sustancia.
Pruebas de Coombs
- Coombs Directa: Detecta anticuerpos ya unidos a los glóbulos rojos. Diagnóstico de anemia hemolítica del recién nacido.
- Coombs Indirecta: Detecta anticuerpos libres en el suero materno (anti-Rh).
Técnicas de Precipitación
Precipitación en Medio Líquido
- Inmunoturbidimetría: Mide la transmitancia con espectrofotómetro. Útil para cuantificar IgA, IgG, IgM.
- Inmunonefelometría: Mide la luz dispersada. Es más sensible para concentraciones pequeñas.
Precipitación en Gel
- Reacción de Ouchterlony (Doble difusión): Técnica cualitativa para estudiar la identidad entre antígenos (identidad total, parcial o no identidad).
- Inmunodifusión Radial (Mancini): Técnica cuantitativa donde el diámetro del anillo de precipitación es proporcional a la concentración del antígeno.
- Inmunoelectroforesis: Combina electroforesis y difusión. Utilizada para el diagnóstico de mieloma múltiple.
- Inmunofijación: Identifica proteínas monoclonales (cadenas pesadas y ligeras). Las proteínas se tiñen con violeta ácido para su visualización.
- Contrainmunoelectroforesis (CIEF): Difusión doble forzada por campo eléctrico.
- Electroinmunodifusión (Rocket): Inmunodifusión radial forzada por campo eléctrico; forma precipitados en forma de cohete.
Técnicas de Fijación del Complemento
Técnicas de Una Etapa
Valoran la capacidad funcional del sistema del complemento. La hemólisis es directamente proporcional a la cantidad de complemento en la muestra (medida a 446 nm).
Técnicas de Dos Etapas
Utilizadas para medir la concentración de Ac o Ag (ej. brucelosis, rubéola).
- Se inactiva el complemento del paciente (56ºC, 30 min).
- Se añade Ag y complemento (reactivo).
- Se añade el sistema indicador (eritrocitos sensibilizados).
Interpretación: La ausencia de hemólisis indica un resultado positivo (el complemento fue consumido por los inmunocomplejos previos).
