Medios de Cultivo Bacteriano: Preparación y Aplicaciones

Los medios de cultivo bacteriano son preparados artificiales que reproducen las condiciones necesarias para el crecimiento de bacterias, permitiendo su aislamiento, identificación y diagnóstico microbiológico.

La siembra se define como la inoculación de un microorganismo en un medio de cultivo.

Estos medios son fundamentales para obtener cultivos puros y estudiar características bacterianas como morfología, pigmentación, hemólisis y sensibilidad a antibióticos.

Composición de los Medios de Cultivo

Generalmente incluyen:

  • Agua.
  • Peptonas, extractos de carne y levadura.
  • Hidratos de carbono.
  • Minerales: hierro, magnesio, fósforo.
  • Sangre o suero (para bacterias exigentes).
  • Agentes solidificantes como agar o gelatina.

Métodos de Esterilización

Para los componentes termolábiles, se utiliza otro tipo de esterilización, como la esterilización por membranas.

Condiciones Ambientales para el Cultivo

Atmósfera Requerida

Las condiciones atmosféricas son cruciales para el desarrollo bacteriano:

  • Aerobias o anaerobias facultativas: Se incuban en presencia de oxígeno ($ ext{O}_2$).
  • Anaerobias estrictas: Requieren una atmósfera específica: 85% de $ ext{N}_2$, 10% de $ ext{H}_2$ y 5% de $ ext{CO}_2$.
  • Microaerófilas: Necesitan concentraciones reducidas de oxígeno: 5% de $ ext{O}_2$, 10% de $ ext{CO}_2$ y 85% de $ ext{N}_2$.

Clasificación de los Medios de Cultivo

Según su Consistencia

  • Líquidos (Caldos): No son solidificantes y se utilizan para cultivar un solo microorganismo.
  • Semisólidos: Contienen aproximadamente 1% de agar y se emplean para analizar características de movilidad de las bacterias.
  • Sólidos: Contienen entre 1.5% y 2% de agar y se utilizan comúnmente en cajas de Petri.

Según su Uso en el Laboratorio

  • Básicos: Para bacterias no exigentes, con nutrientes mínimos.
  • Enriquecidos: Para bacterias exigentes, contienen adiciones como sangre o suero.
  • Selectivos: Permiten el crecimiento de ciertas bacterias e inhiben el de otras.
  • Diferenciales: Permiten distinguir entre diferentes tipos de microorganismos basándose en sus características metabólicas.

Técnicas de Siembra en Placas

Métodos de Estrías

Existen varias técnicas para distribuir el inóculo sobre la superficie del medio sólido:

Agotamiento de Ansa

Se flamea el ansa, se enfría y, después de rozar la siembra previa, se realizan estrías sucesivas sin recargar el ansa.

Depósito y Posterior Quemado

Se carga el ansa con la muestra y las estrías se extienden sobre un área pequeña de la superficie de la placa. Se retira el ansa, se quema a la llama, y luego de enfriarla en el interior de la placa se hacen nuevas estrías por otra zona tocando ligeramente la muestra sembrada anteriormente.

Otras Técnicas

  • Siembra por cuadrantes.
  • Siembra de técnica masiva: Se siembran los microorganismos por medio de un hisopo pasándolo por toda la caja en diferentes direcciones.

Observación de Colonias Bacterianas

Características Morfológicas Generales

Se observan diversos aspectos de las colonias:

  • Bordes regulares y superficie lisa.
  • Bordes irregulares y superficie rugosa.
  • Superficies plana, cóncava, convexa y umbilicada.

Observación en Medios Líquidos

El crecimiento en caldos se caracteriza por:

  • Turbidez: Enturbiamiento en toda la masa del cultivo.
  • Grumos: Desarrollo formando grumos que se depositan en el fondo del tubo, dejando el resto del líquido transparente.
  • Sedimentos: Asentamiento presente en el fondo.
  • Velo superficial: Desarrollo en la superficie formando una película.
  • Color: Posible aparición de coloración en el medio de cultivo.

Observación en Medios Sólidos

Las colonias en agar presentan las siguientes características:

Tamaño y Consistencia

  • Tamaño: Uniforme, con dimensiones que pueden alcanzar unos centímetros de diámetro.
  • Consistencia: Blanda, seca o viscosa.

Forma y Elevación

La forma depende del borde y del espesor:

  • Borde: Puede ser liso, entero, ondulado o aserrado.
  • Espesor (Elevación): Puede ser chata, elevada, convexa, cónica o crateriforme.

Pigmentación y Olor

La producción de pigmentos se clasifica según su localización:

  • Cromóforos: El pigmento está dentro de la bacteria y no colorea ni la colonia ni el medio de cultivo (ej. bacterias sulfuradas).
  • Paracromóforos: El pigmento se encuentra en la pared celular, por lo que la colonia se ve coloreada, pero no tiñe el medio (ej. Staphylococcus aureus).
  • Cromóparos: El pigmento se libera al exterior y colorea el medio de cultivo (ej. Pseudomonas aeruginosa).

Olor: Algunas cepas desarrollan olores característicos que son útiles para la orientación en su identificación.

Evaluación de la Hemólisis

La capacidad de lisis de los glóbulos rojos se clasifica así:

  • Hemólisis Beta: Halo claro, indica lisis total.
  • Hemólisis Alfa: Halo verdoso, indica lisis parcial.
  • Hemólisis Gamma: Sin cambios, indica no hemólisis.